Особенности И Принципы Выделения Чистых Культур Бактерий

Содержание статьи:


  • Посев по голду
  • М11-Культуральные_свойства_бактерий._Выделение_чистой_культуры
  • Методика посева мочи на микрофлору
  • Посев по голду

    Микроскопия и культивирование в стоматологии. Определение чувствительности к антибиотикам

    Изучение качественного состава микроорганизмов в зубном налете, содержимом зубодесневых борозд и ПК проводят с помощью микроскопии в темном поле или фазово-контрастной микроскопии по М. О. Биргеру (1982).

    При фазово-контрастной микроскопии определяют процентное содержание пяти морфологических форм микроорганизмов (кокки, неподвижные палочки, подвижные палочки, извитые формы, филаменты). Рассчитывают коэффициент устойчивости микроорганизмов как соотношение неподвижных и подвижных форм микроорганизмов.

    Со времен Коха и Пастера культивирование было основным методом выделения и изучения свойств микроорганизмов. Современные знания о свойствах микрофлоры ротовой полости были получены с использованием культуральных методов, и молекулярно-биологические работы по изучению орального микробного сообщества в основном подтверждают данные классических исследований, лишь несколько расширяя спектр микроорганизмов биопленки.

    Помимо классических и синтетических сред было разработано множество селективных сред, поддерживающие рост только определенных групп микроорганизмов, и дифференциальных, на которых колонии нужного вида клеток окрашивались, тогда как остальные оставались бесцветными. Однако во всех случаях формирование колонии проводится из единственной клетки — чистой культуры, которая в дальнейшем характеризуется микроскопически и/или по физиологическим и биохимическим свойствам.
    Одним из часто применяющихся в клинической практике культуральных микробиологических методов является метод посева по Gold (метод секторных посевов).

    Для определения количественного состава микроорганизмов методом посева по Gold материал собирают с помощью стерильного стандартного диска диаметром 6 мм, изготовленного из целлофановой пленки толщиной 40 мкм.

    Диск вводят в ПК пуговчатым зондом так, чтобы он был согнут пополам. Оставляют на 1 мин для заполнения пространства между согнутыми краями диска содержимым ПК, после чего диск извлекают пинцетом и помещают в пробирку с фосфатным буфером. Взвесь тщательно гомогенизируют и делают посев на кровяном агаре, используя бактериологическую петлю диаметром 2 мм (емкость 0,005 мл). По окончании инкубации проводят подсчет колоний по секторам.
    Количественный состав микроорганизмов оценивают по числу микроколоний на 1 ед. площади диска.

    Видео по теме: 7. Посев в жидкую среду

    Метод полуколичественной оценки роста аэробной и анаэробной флоры разработан для культивирования факультативных анаэробных микроорганизмов. Материал для микробиологического исследования забирают целлофановым диском и помещают его в пробирки с питательной средой для контроля стерильности, обогащенную пептоном, с добавками твина и гемина (производства г. Оболенск, Московской обл.). Создание анаэробных условий при использовании этой среды обеспечивается содержанием в ее составе тиогликолята натрия.

    Образование колоний после инкубации на поверхности питательной среды и в глубину до 1 см оценивают как рост аэробной флоры, а формирование колоний в более глубоких слоях питательной среды — как рост факультативных анаэробных микроорганизмов.

    Для выявления дисбиотических сдвигов в полости рта проводят исследование микрофлоры на дисбактериоз по критериям В. В. Хазановой (1996): дисбиотический сдвиг, дисбактериоз I—II, III и IV степени.

    Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам используют два метода: диско-диффузионный и метод разведений антибиотика в плотной или жидкой питательной среде.

    Методика С. М. Навашина (1982) заключается в определении чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам путем диффузии в агар с помощью бумажных дисков, пропитанных антибиотиками.

    Видео по теме: Выращивание эустомы методом \

    Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют по диаметру окружности свободной от колоний зоны вокруг диска, которая свидетельствует о задержке роста микрофлоры: чувствительный, среднеустойчивый, устойчивый.

    Необходимо отметить, что примерно 50—60 % микрофлоры, вегетирующей в тканях пародонта, относятся к трудно культивируемым видам микроорганизмов. Некоторые микробы не формируют видимых глазом колоний. Другие микроорганизмы иногда переходят в некультивируемое состояние при обработке солевыми растворами, ледяной водой, низкими температурами. Третьи просто не способны усваивать питательные вещества из сред, стандартно применяемых для культивирования, так как требуют каких-то симбионтов, или питательных добавок, или нуждаются в особых поверхностях для прикрепления и нормальной жизнедеятельности.
    Следовательно, определенные виды микроорганизмов не могут быть получены в виде чистой культуры и могут быть охарактеризованы только косвенно.

    Использованные источники: meduniver.com

    М11-Культуральные_свойства_бактерий._Выделение_чистой_культуры

    1. Тема: Культуральные свойства бактерий. Выделение чистой культуры бактерий.

    2. Цели занятия : Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.

    Посмотрите видео: Посев мочи методом Голда

    3. Задачи занятия :

    3.1. Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах.

    3.2. Ознакомиться с основными характеристиками колоний бактерий.

    3.3. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.

    клинических наук в

    бактерий на плотных

    рост бактерий на

    культур в жидкие и

    ухода за больными

    зарубежный опыт по

    4. Продолжительность занятия в академических часах : 3 часа.

    5. Контрольные вопросы по теме :

    5.1. Характер роста бактерий на плотных питательных средах.

    5.2. Характер роста бактерий в жидких питательных средах.

    5.3. Методы выделения чистых культур бактерий.

    6. Задания и методические указания к их выполнению .

    На занятии студенту необходимо выполнить:

    6.1. Ответить на вопросы преподавателя.

    6.2. Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.

    6.3. Выполнить самостоятельную работу.

    Рост микробов на плотной питательной среде характеризуется образованием колоний. Колонии – видимые невооруженным глазом скопления бактериальных особей на поверхности или в толще плотной питательной среды. Для характеристики колоний используют следующие признаки:

    1. По размеру выделяют следующие колонии:

    - точечные - диаметр менее 1 мм;

    - мелкие – диаметр 1-2 мм;

    - средние – диаметр 2-4 мм;

    - крупные – диаметр 4-6 мм и более.

    Посмотрите видео: Посев на скошенный мпа

    2. Форма колонии:

    - ризоидная (корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев). 3. Контуры края колонии (определяют при рассмотрении колонии под лупой

    или микроскопом с малым увеличением):

    - ровные края в виде четко выраженной линии;

    - неровные края ( фестончатый, волнистый, эрозированный или зазубренный, бахромчатый).

    4. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и формой на вертикальном разрезе. Определяется невооруженным глазом или при помощи лупы при рассматривании сверху и сбоку:

    - каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы; - плоско-выпуклые колонии; - конусообразные колонии;

    - колонии с приподнятой серединой; - колонии с вдавленным центром; - плоские колонии.

    5. Поверхность колонии изучают при помощи лупы или под микроскопом при малом увеличении:

    - матовая или блестящая с глянцем; - сухая или влажная; - гладкая или шероховатая.

    Гладкие колонии обозначают буквой S (англ. smooth – гладкий), шероховатые

    - буквой R (англ. rough – шероховатый).

    6. Цвет колонии . Определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует (колонии бесцветны или молочно-мутного цвета). Пигментообразующие виды дают колонии кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.

    Посмотрите видео: Практикум по микробиологии. Среды. Посев. Оценка колоний. Дисковая проба

    7. Структура колоний . Определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре:

    - гиалиновые колонии; - зернистые колонии;

    - нитевидные или волокнистые колонии.

    8. Консистенция колоний . Исследуют прикосновением или взятием из нее части материала бактериологической петлей:

    - пастообразные, вязкие или слизистые; - волокнистые или кожистые; - хрупкие сухие.

    Характер роста бактерий в жидких питательных средах:

    1. Рост бактерий с равномерным помутнением среды.

    2. Придонный рост бактерий (образование осадка на дне).

    3. Пристеночный рост бактерий (образование рыхлых хлопьев,

    прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда).

    4. Поверхностный рост бактерий (образование пленки на поверхности жидкой питательной среды).

    Рост в полужидкой питательной среде характеризуется помутнением всей толщи среды или образованием воронки цилиндрической или конической формы.

    Выделение чистой культуры бактерий.

    Чистая культура – культура микроорганизмов одного вида (потомство одной клетки). Методы выделения чистой культуры:

    1. Метод Дригальского – последовательный пересев культуры шпателем в 3 чашки Петри с агаром.

    2. Метод параллельных штрихов – посев культуры штрихами по поверхности агара.

    3. Метод Голда – метод секторных посевов. При этом чашку с агаром делят на 3 сектора. На первый сектор засевают культуру петлей частыми штрихами, после чего петлю стерилизуют (фламбируют). Затем стерильной петлей уже более редкими параллельными штрихами переносят микроорганизмы из первого сектора во второй, после чего вновь фламбируют петлю. Аналогично стерильной петлей переносят микроорганизмы из второго сектора в третий.

    Смотреть видео: СТРИМ СТАНДОФФ 2 РАЗДАЧА ГОЛДЫ / ПРОМОКОДОВ / STANDOFF 2 ВЫШЛО ОБНОВЛЕНИЕ 0.19.0

    4. Метод Коха (метод рассева в глубине среды) . Культуру последовательно разводят в расплавленном агаре в пробирках. Затем содержимое пробирок переносят

    в чашки Петри и инкубируют в термостате. Изолированные колонии вырастают в толще агара. В настоящее время этот метод используется редко.

    После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет правила выполнения самостоятельной работы

    1. Описание бактериальных колоний, выросших на демонстрационных чашках Петри.

    2. Описание характера роста бактерий в жидких питательных средах.

    3. Пересев бактерий из изолированных колоний штрихом на плотные питательные среды с целью выделения чистой культуры.

    7. Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия :

    Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.

    8. Литература для подготовки :

    1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.

    Посмотрите видео: Бак посев на кишечную группу инфекций. Ещё с наказом #167, который уже отменён.

    2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 1 : учеб. по дисциплине «Микробиология, вирусология и иммунология» для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 «Лечеб. дело», 060103.65 «Педиатрия», 060104.65 «Медико-профилакт. дело» / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 448 с.: ил.

    3. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 2 : учеб. по дисциплине «Микробиология, вирусология и иммунология» для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 «Лечеб. дело», 060103.65 «Педиатрия», 060104.65 «Медико-профилакт. дело» / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 480 с.: ил.

    1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и

    доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.

    2. Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.

    3. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.

    Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В., аспирантом кафедры Зорниковым Д.Л.

    Смотреть видео: Посев воды на Общее микробное число (ЗМЧ)

    Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.

    Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

    Использованные источники: studfile.net

    Методика посева мочи на микрофлору

    Особенности бактериального посева мочи

    Отсевая материал из верхнего края роста культуры в конденсационную воду свежескошенного агара и повторяя это несколько раз, можно выделить чистую культуру. Обычно достичь полного подавления сопутствующей микрофлоры не удается. Механического разобщения Биологические. Этой же петлёй, не изменяя её положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. Посев истощающим штрихом.

    Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробку из пробирки вынимают правой рукой IV и V пальцами, не прикасаясь к той ее части, которая входит внутрь пробирки. Мы поможем в написании вашей работы! Орг - год. Использование активной подвижности на агаровых средах Метод Шукевича предназначен для выделения бактерий рода Proteus.

    Это приводит к удлинению времени инкубации, изменению некоторых свойств, частичному подавлению. Вырастут только туберкулезные палочки, так как кислотоподатливые микробы погибли под действием кислоты. Как компании прогнозируют привычки и манипулируют ими. Используют 3 чашки Петри с питательной средой. Оси и плоскости тела человека - Тело человека состоит из определенных топографических частей и участков, в которых расположены органы, мышцы, сосуды, нервы и т.

    Биологический метод выращивания анаэробов по Фортнеру. Прибор состоит из нагревателя, камеры, двойных стенок, между которыми циркулирует воздух или вода. Застывшую среду обязательно подсушивают, так как влажная поверхность ее способствует образованию сливного роста. Вырастут только туберкулезные палочки, так как кислотоподатливые микробы погибли под действием кислоты. Исследуемый материал вносится мерно в расплавленный и остуженный питательный агар, тщательно перемешивается с питательной средой и выливается в пустую стерильную чашку Петри. Топ: Процедура выполнения команд. Световозвращающие элементы на детской одежде Как победить свой возраст?

    Видео по теме: Посев мочи методом Голда

    Микроскопия и культивирование в стоматологии. Определение чувствительности к антибиотикам

    Вырастут только споровые бактерии, так как споры их остались живыми и дали рост. Методика приготовления пластинчатого агара. При ношении контактных линз мазок также берется и с их внутренней поверхности. Общие условия выбора системы дренажа : Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого После взятия мазка тампон помещают в пробирки отдельно для каждого глаза , подписывают и доставляют в лабораторию в кратчайшие сроки.

    За счет "роения" протей образует макроколонию на всей свободной поверхности агаровой среды. Схемы и конструкции Посев по методу Дригальского Этот метод используется при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой гной, испражнения, мокрота. Посев шпателем по методу Дригальского. Наносим на середину чашки и несколько раз проводим по середине чашки, растирая каплю, затем неотрывными движениями делаем не менее 40 штрихов вверх и обжигаем петлю. Для культивирования микроорганизмов используют термостаты.

    Достоинства метода техническая простота метода эффективное разделение бактерий есть много модификаций, которые можно выбрать в зависимости от типа исследуемого материала есть модификации, позволяющие проводить полуколичественные исследования например, метод Gold при исследовании мочи Недостатки метода при большом количестве сопутствующей микрофлоры колонии искомых микроорганизмов могут располагаться в зоне сплошного роста сопутствующих микроорганизмов. Топ: Процедура выполнения команд. Затем шпатель, не обеззараживая, переносят во 2-ю чашку и втирают оставшиеся на нём микроорганизмы в поверхность питательной среды. Через 2—3 сут в столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов. Для выделения споробразующих бактерий можно прогреть исследуемый материал 20 мин.

    Видео по теме: Готовим гладиолусы к посадке.

    Бактериологические посевы

    Порядок взятия смывов: Смывы берутся с любой поверхности площадью 10 см. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду свежескошенного агара.

    При конъюнктивите предварительно слегка оттягивают веко, чтобы ресницы не коснулись тампона. Для освобождения материала от сопутствующей флоры, его обрабатывают раствором кислоты. Гной собирается движением от наружного угла глаза к внутреннему. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав между ладонями. Сила воли ведет к действию, а позитивные действия формируют позитивное отношение. Метод применяется при выделении кислото и щелочеустойчивых бактерий. Термостат — это аппарат, в котором поддерживают постоянную температуру.

    Для посева по методу Дригальского берут шпатель и несколько чашек В бактериологии широко применяются сухие питательные среды промышленного производства, которые представляют собой гигроскопические порошки, содержащие все компоненты среды, кроме воды. Достоинства метода Высокая эффективность при уничтожении контаминантов Возможность не использовать селективные среды 3.

    Уничтожение сопутствующих микроорганизмов позволяет произвести высев на неселективную среду. Методы выделения чистых культур путем механического разобщения. Петлю обжигаем, остужаем и по вторым 4-м штрихам наносим 4 штриха, не касаясь большого поля. Общие условия выбора системы дренажа : Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого Аура как энергетическое поле : многослойную ауру человека можно представить себе подобным Бактериологический посев на разнообразные питательные среды для получения роста колоний возбудителя заболевания. Так как на конъюнктиве глаза условно-патогенные микроорганизмы обитают в небольших количествах у всех здоровых людей, для уточнения природы гнойного воспаления часто требуется не только выделение всех микробов, найденных в мазке, но и подсчет их количества.

    Тампоном берут мазок из имеющихся эрозий. Мочу чуть взбалтываем, открываем и обожжённой петлёй остудить берём каплю. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду свежескошенного агара. Уважаемый посетитель! Таблица 8. Национальное богатство страны и его составляющие : для оценки элементов национального богатства используются

    Капуста Быстрого Приготовления Рецепт ВкуснаяРецепт Острой Капусты КусочкамиСалат С Китайской Капустой И ТунцомКарбофос Вреден Ли Для ЧеловекаСалат С Пекинской Капустой И КреветкамиКогда Можно Давать Квашеную Капусту РебенкуПосле Чего Сажать МорковьАстранция Эбби РоудКак Сажать Грецкий Орех Из ОрехаБрюссельская Капуста СоставКак Сделать Хомут Для Лошади Своими РукамиБрюссельская Капуста СоставФиолетовая Капуста Польза